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使用维生素Delisa试剂盒前要做这些准备工作

发布时间:2021-12-28   点击次数:66次
  使用维生素Delisa试剂盒前需要提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
  将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。
  标准品:于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释。建议配制成以下浓度:按照稀释方法图例标准品和样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品和样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。
  生物素化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
  酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。
  洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后,即甩去,之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
  阴性对照孔每孔加入pbs50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
  酶标板置37℃培养箱的维生素Delisa试剂盒内,孵育60min。
  每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。
  每孔加tmb显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
  每孔加100μl2mol/lh2so4终止反应。
  数据处理:在得出标本s和阴性对照n的od值后,计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。
  分别测450nm吸光值w1和630nm吸光值w2,终测得的od值为两者之差w1-w2,以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
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