PCR试剂盒标准操作流程,一起来了解一下
更新时间:2022-03-11 点击次数:565次
PCR试剂盒标准操作流程:
一、试剂制备:
1、DNA模板。
2.特定引物。
3.dNTPMix。
4.PCRbuffer。
5、热启动酶。
二、行动
1.构建反应系统
在0.5ml的离心管内依次加入各组分。
采用热启动酶进行扩增,使其在常温下运行,非热启动酶在低温配置反应体系。
根据试剂盒说明书设定反应时间和温度,扩增结束后进行电泳鉴定.
三、琼脂糖核酸电泳
把电泳所用的器皿蒸馏水清洗干净,把梳子固定好。
以待分离片段的大小为基础,制备适当浓度的琼脂糖凝胶,精确称取一定数量的琼脂糖,加入锥形瓶,并加入约30ml电泳缓冲液(TAE)。
用微波炉加热熔化,冷却至40℃左右,充分混合后倒入电泳槽。
在室温下进行40分钟的凝固,小心地拔出梳子,将凝胶放入电泳槽准备点样。
向电泳槽内加入电泳缓冲液,漫过胶体表面即可,点样孔内无气泡。
点样前准备好,(在八连管中)加入5ul样品,把1ul的6xLodingbuffer和1ul的染料混合,用抢把混合的样品缓慢地注入点样孔,注意不能有串孔。
按正负极(红,黑,黑)接通电源,电压40-60V,时间30-40min,根据溴酚蓝的位置可判断电泳是否终止。
结束电泳,关闭电源,观察凝胶成像,通过对比确定碎片的大小。
以上就是PCR试剂盒标准操作流程!