欢迎来到上海谷研实业有限公司
咨询热线:021-39921927
技术文章您的位置:网站首页 >技术文章 >PCR试剂盒标准操作流程,一起来了解一下

PCR试剂盒标准操作流程,一起来了解一下

更新时间:2022-03-11   点击次数:565次
       PCR试剂盒标准操作流程:
  一、试剂制备:
  1、DNA模板。
  2.特定引物。
  3.dNTPMix。
  4.PCRbuffer。
  5、热启动酶。
  二、行动
  1.构建反应系统
  在0.5ml的离心管内依次加入各组分。
  采用热启动酶进行扩增,使其在常温下运行,非热启动酶在低温配置反应体系。
  根据试剂盒说明书设定反应时间和温度,扩增结束后进行电泳鉴定.
  三、琼脂糖核酸电泳
  把电泳所用的器皿蒸馏水清洗干净,把梳子固定好。
  以待分离片段的大小为基础,制备适当浓度的琼脂糖凝胶,精确称取一定数量的琼脂糖,加入锥形瓶,并加入约30ml电泳缓冲液(TAE)。
  用微波炉加热熔化,冷却至40℃左右,充分混合后倒入电泳槽。
  在室温下进行40分钟的凝固,小心地拔出梳子,将凝胶放入电泳槽准备点样。
  向电泳槽内加入电泳缓冲液,漫过胶体表面即可,点样孔内无气泡。
  点样前准备好,(在八连管中)加入5ul样品,把1ul的6xLodingbuffer和1ul的染料混合,用抢把混合的样品缓慢地注入点样孔,注意不能有串孔。
  按正负极(红,黑,黑)接通电源,电压40-60V,时间30-40min,根据溴酚蓝的位置可判断电泳是否终止。
  结束电泳,关闭电源,观察凝胶成像,通过对比确定碎片的大小。
  以上就是PCR试剂盒标准操作流程!