ArcticExpress（DE3）pRARE2 感受态细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-2(mouse TIMP-2)
小鼠肿瘤坏死因子-a(mouse TNF-a)
小鼠肿瘤坏死因子-b(mouse TNF-b)
小鼠肿瘤坏死因子-r(mouse TNF-r)
小鼠组织纤溶酶原激活剂(mouse t-PA)
小鼠转铁蛋白(mouse Transferrin)
小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse TSLP)
小鼠血栓烷B2(mouse TXB2)
小鼠可溶性肿瘤坏死因子-a受体(mouse sTNF-aR)
小鼠组织多肽抗原(mouse TPA)
小鼠血小板生成素(mouse TPO)
小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(mouse TRAIL/APO 2L)
小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(mouse TRAIL R1)
小鼠凝血酶敏感蛋白-1(mouse TSP-1)
小鼠血栓调节蛋白(mouse TM)
小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(mouse uPA)
小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(mouse uPA-R)
小鼠血管细胞粘附分子-1(mouse sVCAM-1)
小鼠血管内皮生长因子(mouse VEGF)
小鼠血管内皮细胞生长因子B(mouse VEGF-B)
小鼠血管内皮细胞生长因子C(mouse VEGF-C)
小鼠血管内皮细胞生长因子D(mouse VEGF-D)
小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(mouse VEGF-R1)
