钙调结合蛋白elisa试剂盒的工作原理及实验规则
发布时间：2023-01-10 点击次数：77次
钙调结合蛋白elisa试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法（ELISA），测定样品中人钙调结合蛋白的水平。向预先包被人钙调结合蛋白抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的人钙调结合蛋白抗体，经过温育和洗涤，去除未结合的组分，然后再加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中人钙调结合蛋白的浓度呈正相关。
钙调结合蛋白elisa试剂盒的实验规则：
1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
10、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
钙调结合蛋白elisa试剂盒用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗MK抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗MK抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的MK呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
