人脂肪干细胞永生化细胞专用培养基传代
1) 当细胞汇合度达到 85%以上时，可进行传代。
2) 在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；
3) 向培养瓶内加入 3ml 无菌的 1×PBS 后，水平放置培养瓶，使PBS 能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃 PBS；
4) 向瓶内加入消化液 1ml，浸润底面后放入 37℃ CO2培养箱中孵育 1~2min；
5) 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若全部消化下来则直接向培养瓶内加入2ml 含 10%FBS 的培养基中，将悬液吸入 15ml 离心管；
① 准备一个无菌的 15ml 离心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培养基；
② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打③）；向之前消化的培养瓶中加入 1ml 继续消化 2min 左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱。
6) 1000rpm 离心 5min；
7) 准备两个新的 T-25 培养瓶，各加入 4ml培养基。
8) 离心完成后，弃上清，用 2ml 培养基重悬离心细胞，将重悬后的细胞转入 2 个 T-25 培养瓶，每个培养瓶各 1ml；
9) 水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO2培养箱中静置培养。
