针对冻融3次的Anti-ACA11样本,除了优化常规WB/ELISA检测外,还可以采用高灵敏度的靶向质谱法提升检出概率,这是目前灵敏度最高的补充检测方案,具体如下:
靶向选择反应监测(SRM)质谱法
这是针对低丰度降解样本的替代检测方法,核心优势是不需要完整全长蛋白,能特异性检测ACA11的特征肽段,哪怕蛋白已经部分降解,只要保留特征肽段就能检出:
预处理简化:不需要富集完整膜蛋白,直接对样本进行酶解,将降解的蛋白切割为肽段即可上机;
特异性强:提前预设ACA11的2-3段特异性特征肽段,质谱会针对性扫描目标质荷比,排除杂质干扰;
灵敏度更高:比常规免疫检测灵敏度高1-2个数量级,能检出降解后残留的低浓度靶标,还能实现准确定量。
如果实验室没有质谱条件,也可以选择化学发光法替代普通显色检测:化学发光的灵敏度比普通显色高约10倍,能检测到低浓度的靶标信号,比优化后的常规免疫检测检出率更高。
需要提醒的是,两种方法都只能提升检出概率,无法弥补靶标降解带来的偏差,结果仍需标注样本冻融次数带来的不确定性。
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