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基因检测试剂盒的使用说明

发布时间:2020-09-15   点击次数:18次
  基因检测试剂盒是一种用于β-半乳糖苷酶报告基因检测的试剂盒,β-半乳糖苷酶是一种常用的报告基因分子,经常与荧光素酶报告基因一起转染细胞,被用作荧光素酶报告基因检测的内参照,从而消除因为质粒的转染效率不同而带来的误差。
  生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒,是以无色的ONPG为底物,在β-半乳糖苷酶的催化下生成,然后通过酶标仪或分光光度计在420nm波长附近测定吸光度,从而实现对β-半乳糖苷酶活性的测定。本试剂盒所提供的裂解液适合于动物细胞的裂解,通常不适合于细菌、真菌和植物细胞的裂解。
  使用说明:
  1、细胞裂解后可以立即测定β-半乳糖苷酶活性,也可以先冻存,待以后再测定。冻存的样品需融解,并达到室温后才可以开始测定。建议使用12、24或48孔板进行报告基因检测。
  2、充分融解β-半乳糖苷酶反应终止液,如有难溶结晶,请在37℃水浴溶解。
  3. 在96孔板中,分别加入5-50微升样品,然后加入报告基因裂解液至50微升。由于不同的细胞体系,不同的转染方法的转染效率相差很大。
  4. 在每个孔中加入β-半乳糖苷酶检测试剂50微升,混合后,盖上96孔板的盖子。可以用保鲜膜封住96孔板防止蒸发,在37℃放置30分钟或直至样品孔内出现浅黄色,通常大约3小时后,吸光度达到平台,孵育更长时间吸光度不会明显升高。
  5. 加入半乳糖苷酶反应终止液终止反应,混匀,尽量避免气泡。
  6. 按仪器操作说明书开启酶标仪或分光光度计,将测定波长设定为420nm,测定吸光度。
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