PCR荧光定量检测试剂盒的操作步骤介绍

　　PCR荧光定量检测试剂盒适用于人血中EB病毒DNA的定量测定，检测结果可供临床参考，但不能单独作为确诊或排除病例的依据。

　　本试剂盒采用荧光PCR技术，通过特异性探针水解释放荧光，监测PCR反应的进行，确定EGFR基因突变情况，该试剂盒可有效检测出微量（1%－5%）的突变型基因，具有高度的灵敏性和特异性，在保证抗原抗体反应物中特异性抗体过量的前提下，首先标准曲线样品及试验样品的α-Gal抗原与特异性抗体反应，然后用人工合成的Gal抗原作为固相抗原，通过ELISA方法检测反应后上清液中的剩余抗体；进而可利用标准曲线计算待测物中的α-Gal抗原含量。

　　操作步骤：

　　1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　2、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

　　3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　6、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

　　7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　8、测定：PCR荧光定量检测试剂盒以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。