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PCR荧光定量检测试剂盒的操作步骤介绍

发布时间:2020-11-18   点击次数:13次
  PCR荧光定量检测试剂盒适用于人血中EB病毒DNA的定量测定,检测结果可供临床参考,但不能单独作为确诊或排除病例的依据。
  本试剂盒采用荧光PCR技术,通过特异性探针水解释放荧光,监测PCR反应的进行,确定EGFR基因突变情况,该试剂盒可有效检测出微量(1%-5%)的突变型基因,具有高度的灵敏性和特异性,在保证抗原抗体反应物中特异性抗体过量的前提下,首先标准曲线样品及试验样品的α-Gal抗原与特异性抗体反应,然后用人工合成的Gal抗原作为固相抗原,通过ELISA方法检测反应后上清液中的剩余抗体;进而可利用标准曲线计算待测物中的α-Gal抗原含量。
  操作步骤:
  1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  2、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
  3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  5、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  6、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
  7、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  8、测定:PCR荧光定量检测试剂盒以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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