染料法荧光定量PCR检测试剂盒的使用方法和注意事项

　　染料法荧光定量PCR检测试剂盒指的是在PCR进行的同时，对其过程进行监测的能力（即实时），因此，数据可在PCR扩增过程中，而非PCR结束之后，进行收集，这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变革。

　　在实时荧光定量PCR (qPCR)中，反应以循环中*检测到目标扩增的时间点为特征，而非在一定循环数后目标分子累计的扩增量，目标核酸的起始拷贝数越高，则会越快观察到荧光的显著增加；相反，终点法检测测量的是PCR循环结束时累计的PCR产物量。

　　一种可以在PCR循环过程中随着PCR产物的累计而对其进行检测的高度特异性双链DNA结合染料，染料试剂可以检测所有双链DNA，包括非特异性的反应产物。因此这样经过特别优化的反应体系，对于获取准确的结果而言是必要的。

　　一、使用方法：

　　样品采集：

　　1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照试剂盒(染料法)检验要求进行。

　　2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌抗凝管，立即混匀。

　　3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。

　　4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。

　　二、注意事项：

　　1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。

　　2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。

　　3) 染料法荧光定量PCR检测试剂盒操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩 增区等)，防止实验室污染。

　　4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。

　　5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待。