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基质裂解素elisa试剂盒的使用要注意哪些问题?

发布时间:2021-03-17   点击次数:57次
  基质裂解素elisa试剂盒用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗体、HRP标记的亲和素,经过洗涤后用底物TMB显色。
  在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色,颜色的深浅和样品中的C3呈正相关,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻,保存过程中如出现沉淀,应再次离心,血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤,不要在37℃或更高的温度加热解冻,应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
    基质裂解素elisa试剂盒的使用要注意的问题
  1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
  2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
  3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体,盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
  4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  5)每孔加入80ul的亲和链酶素,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  基质裂解素elisa试剂盒测定法的灵敏度来自作为报告的酶。*,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象,因此该体系常被称为酶放大体系。
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