基质裂解素ELISA试剂盒使用时的具体操作步骤
更新时间：2024-01-25 点击次数：162次
基质裂解素（MatrixMetalloproteinases，MMPs）是一类能够降解细胞外基质的蛋白酶，参与许多生理和病理过程，如组织重塑、炎症反应、肿瘤侵袭和转移等。因此，对MMPs的检测在生物医学研究中具有重要意义。ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种常用的免疫学检测方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。基质裂解素ELISA试剂盒的主要成分包括预涂覆有抗MMPs抗体的96孔板、生物素标记的抗MMPs抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素、底物溶液（TMB）、终止液（硫酸）以及洗涤液。此外，试剂盒还提供了标准品，用于制作标准曲线，以便计算样品中MMPs的浓度。
使用基质裂解素ELISA试剂盒的操作步骤如下：
1.准备试剂和样品：将试剂盒和样品平衡至室温，按照说明书稀释标准品和待测样品。
2.加样：将稀释好的标准品和待测样品分别加入到预涂覆有抗MMPs抗体的96孔板中，每孔100μL，每个样品设3个复孔。同时设置空白对照孔，加入100μL的样品稀释液。
3.孵育：用封板膜封住96孔板，室温孵育2小时。
4.洗涤：弃去孔内液体，每孔加入300μL洗涤液，静置1分钟后弃去，重复洗涤5次，拍干。
5.加入生物素标记的抗MMPs抗体：每孔加入100μL生物素标记的抗MMPs抗体，用封板膜封住96孔板，室温孵育1小时。
6.洗涤：重复步骤4。
7.加入HRP标记的链霉亲和素：每孔加入100μLHRP标记的链霉亲和素，用封板膜封住96孔板，室温孵育1小时。
8.洗涤：重复步骤4。
9.加入底物溶液：每孔加入100μL底物溶液（TMB），用封板膜封住96孔板，室温避光孵育10-15分钟。
10.加入终止液：每孔加入50μL终止液（硫酸），轻轻振荡混匀。
11.测定吸光度：在450nm波长下测定各孔的吸光度值（OD值）。
12.计算结果：根据标准品的OD值绘制标准曲线，再根据待测样品的OD值计算其MMPs的浓度。
基质裂解素ELISA试剂盒具有以下优点：
1.灵敏度高：ELISA方法具有很高的灵敏度，可以检测到pg/mL级别的MMPs。
2.特异性强：通过特异性抗体与抗原的结合，ELISA方法具有很高的特异性。
3.操作简便：ELISA方法操作简便，无需复杂的仪器设备，适合大规模样本检测。
4.可定量：通过标准曲线，ELISA方法可以准确计算样品中MMPs的浓度。
