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转基因品系马铃薯SEMT15-102 PCR试剂盒

转基因品系马铃薯SEMT15-102 PCR试剂盒

产品时间:2020-08-04

访问量:655

厂商性质:经销商

生产地址:进口、国产

简要描述:
转基因品系马铃薯SEMT15-102 PCR试剂盒低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供DN段作为阳性对照。
品牌其他品牌CAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号GOYP63645
规格50次供货周期现货
主要用途公司产品仅用于科研应用领域化工
产品名称 转基因品系马铃薯SEMT15-102 PCR试剂盒
英文名称 PCR kit semt15-102 for transgenic potato lines
规格 50次

 

产品优势:
1.随时可用。
2.优化的缓冲液可增强特异性并减少引物二聚体的形成。
3.高灵敏度,特异性和可靠性。
4.为不同的qPCR仪器提供了被动参考染料。

使用方法:
一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。

PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

VERO C1008 (E6)非洲绿猴肾细胞 VERO C1008 (E6) of African green monkey kidney cells DMEM培养基+10%FBSβ-D-半乳糖五乙酸酯(>98%BR)质量规格:>98%BRPentaacetyl-β-D-galactopyranose

IFNA1 Protein Rat 重组大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (His 标签)人造沸石质量规格:Tech GradePermutit

LLC-WRC 256(大鼠腹水癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CHL/IU [ CHL-11 ](中国仓鼠肺细胞)酚肽二1酸四钠(>96%,BC)质量规格:>96%,BCPhenolphthalein diphosphate tetra salt

原代上皮细胞培养特制添加剂Many types of cells包装:5/2.5/1ml吩噻嗪(>98%,BR)质量规格:>98%,BRPhenothiazine

BTK Others Human Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 秦皮甲素质量规格:HPLC98%,BREsculin

BC-022(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠浆细胞瘤;MPC-11PHOSPHORAMIDON嶙酰二肽蛋白组学级5MG119942-99-3Frozen

人结膜成纤维细胞总RNAHConF NA没食子醋儿茶速没食子醋酯(+4) (-)-Gcllocctqchin gcllctq 433-96-9

CAT Others Human CAT / Catalase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) L-脯安醋苄酯言醋盐 L-Prolinq bqnzyl qstqr xy7nochloridq 60668-01-1

豚鼠心肌细胞;GP-H1普鲁兰酶128℃,避光

A-673细胞,横纹肌瘤细胞 Hela细胞耐药亚株,Hela/DDP细胞 小鼠胚胎成纤维细胞;3T3-L1Betaine 50g/100g/1kg原装 Sigma B2629

细胞名称 种属8-羟基盐shēng huà shì jì容量:RT100

JAM2 Others Mouse 小鼠 JAM-2 / JAM-B 人细胞裂解液 (阳性对照) 4,4,4-亚基三本晴 4,4',4''-Mqthylidqnqtrisbqnzonitnilq 11340-31-6

艾氏腹水瘤瘤株;Ehrlich4-甲基伞形酮酰-β-D-糖苷shēng huà shì jì容量:285

人虹状体上皮细胞 (HIPEpiC)( 5×105 )Paraffinoil石蜡油100AR99%

CM-M035小鼠肝动脉平滑肌细胞*培养基100mL73-24-5腺嘌呤;胰碱;腺碱;腺尿环;6-基尿环Adenine;6-AMiH-purine;6-AMino-3H-purine;6-AMino-9H-purine;1H-Purine-6-aMine;1,6-Dixy7no-6-iMinopurine;3,6-Dixy7no-6-iMinopurine

EPD5 Others Human EPD5 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 钽标准溶液(1000μg/ml)Tantalum standard质量规格:1000μg/ml

CM-M049小鼠子宫内膜上皮细胞*培养基100mL碲标准溶液(1000μg/ml)Tellurium standard质量规格:1000μg/ml

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌细胞株 神经母细胞瘤细胞,LAN-5细胞 PA317(鼠胚胎成纤维细胞)铽标准溶液(1000µg/mL,基体:10%HCl)Terbium standard质量规格:1000µg/mL,基体:10%HCl

转基因品系马铃薯SEMT15-102 PCR试剂盒小鼠肥大细胞瘤细胞;P815钒标准溶液(1000μg/ml,溶剂:0.5mol/L HNO3)Vanadium solution质量规格:1000μg/ml,溶剂:0.5mol/L HNO3

CD5 Others Human CD5 人细胞裂解液 (阳性对照) 钇标准溶液(1000μg/ml in 10% HCl)Yttrium standard质量规格:1000μg/ml in 10% HCl

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