转基因元件NtQPT1启动子LAMP试剂盒

产品优势：
1.产品仅用于科研随时可用。
2.优化的缓冲液可增强特异性并减少引物二聚体的形成。
3.高灵敏度，特异性和可靠性。
4.为不同的qPCR仪器提供了被动参考染料。

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

使用方法:
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

LAYN Others Human 人 Layilin 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫酸钙(>99%,BR)质量规格：>99%,BRCalcium sulfate, anhydrous

CM-H084人脐静脉平滑肌细胞*培养基100mL二环己基碳二亚胺(>99%,BR)质量规格：>99%,BRDCC, Dicyclohexylcarbodiimide

SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人细胞裂解液 (阳性对照) 丁二酸二甲酯(>99%,BR)质量规格：>99%,BRDimethyl succinate

小鼠角膜上皮细胞*培养基 100mL二甲基甲酮钠盐(>97%,BR)质量规格：>97%,BRDimethylglyoxime  salt

L6565小鼠白血病克隆细胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS直接蓝71(≥50%,BR)质量规格：≥50%,BRDirect blue 71

软骨细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)N-苯甲酰-2'-脱氧胞苷质量规格：>98%,BRbz-dC

MAP3K8 Others Human 人 TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) N6-苯甲酰-2'-脱氧腺苷质量规格：>98%,BRbz-dA

KM小鼠子瘤株;U145'-O-三苯甲基尿苷质量规格：>97%,BRTrt-rU

NIH/3T3细胞，胚胎成纤维细胞 人高转移肝癌细胞,LM3细胞 CL-0104HEp-2(人喉表皮样癌细胞)5×106cells/瓶×2Trt-dU质量规格：>98%,BRTrt-dU

叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦杂质)质量规格：美国进口N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)

SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1 膀胱变移细胞癌，T-24细胞 U251(胶质瘤细胞)Murexide基紫色酸1克BS

EB病毒转化的人B细胞;KMY09275,5`-二流双(2-肖基本加醋) 3-Ccrboxy-4-nitnophqnyl disulfidq 69-78-3

EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人细胞裂解液 (阳性对照) Manganesechloride录化亚锰5克BR，99%

CM-R101大鼠脑动脉血管平滑肌细胞*培养基100mLBT四唑蓝500毫克超，50mg/ml，有害品

HEXB Others Human 人 Hexosaminidase B / HEXB 人细胞裂解液 (阳性对照) 302-84-1DL-丝酸;DL-蚕丝基酸;DL-2-基-3-羟基酸;DL-β-羟基酸DL-Serine;DL-2-AMino-3-xy7noxypropionic acid;DL-β-xy7noxyalanine;(±)-2-AMino-3-xy7noxypropionic acid; DL-3-xy7noxy-α-alanine

人整合SV40基因的上皮细胞;HBL-100 [HBL100]铌标准溶液(1000μg/ml)Niobium standard质量规格：1000μg/ml

DNASE1 Others Human 人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 镍标准溶液(100μg/mL，基体:1%HNO3)Nickel Standard质量规格：100μg/mL，基体:1%HNO3

CL-0384MDA-MB-468-06(人癌细胞)5×106cells/瓶×2钾标准溶液(500mg/L,溶剂：水)Potassium standard质量规格：500mg/L,溶剂：水

Mv1Lu细胞，貂肺上皮细胞 人红白细胞白血病细胞,HEL细胞 人皮肤成纤维细胞;HSAS4钾标准溶液(1000µg/mL,基体:1%HCl) Potassium Solution质量规格：1000µg/mL,基体:1%HCl

鲤鱼尾鳍细胞;YZ16镨标准溶液(1000μg/ml)Praseodymium standard质量规格：1000μg/ml

PCR实验步骤：

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
转基因元件NtQPT1启动子LAMP试剂盒⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。