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ANG-2 elisa试剂盒

ANG-2 elisa试剂盒

产品时间:2020-09-01

访问量:13

厂商性质:经销商

生产地址:进口、国产

简要描述:
ANG-2 elisa试剂盒 是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被ANG-2 elisa试剂盒 捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。
品牌其他品牌CAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号GOY-H8530
规格48T/96T供货周期现货
主要用途公司产品仅用于科研应用领域化工

准备试剂与收集血样:
ANG-2 elisa试剂盒 1.  收集标本:血清、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反复冻融。
2.  标准品液配制:使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管,管加标本稀释液 900ul ,第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反复作对倍稀释,从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。
4.  洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)


检测程序:
1.  加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2.  洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4.  洗板:同前。
5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6.  洗板:同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗处反应15 分钟。
8.  每孔加入100ul 终止液混匀。
9.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
性能:
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:检测浓度小于0.1 U/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
使用方法:
测定法的灵敏度来自作为报告的酶。众所周知,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。   24μg/ml    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
 12μg/ml    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
 6μg/ml     3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
 3μg/ml     2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
 1.5μg/ml   1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

实验规则:

1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
4、实验时,要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。
10、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

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