转基因品系马铃薯ATBT04-27 PCR试剂盒

产品优势：
1.随时可用。
2.优化的缓冲液可增强特异性并减少引物二聚体的形成。
3.高灵敏度，特异性和可靠性。
4.为不同的qPCR仪器提供了被动参考染料。

使用方法:
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

TNFSF8 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 人细胞裂解液 (阳性对照) 氘代苯-D6(50g)质量规格：D,99.5%Benzene-D6

人小神经胶质细胞HM氘代苯-D6(100g )质量规格：D,99.5%Benzene-D6

K562/Adr细胞，人白血病阿霉素耐药株 小鼠T细胞,Cl.Ly1+2-/9细胞 前脂肪细胞分化培养基PADM氘代DMSO-D6(10 g )质量规格：D,99.9%Dimethyl Sulfoxide-D6

MDA-MB-415(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2氘代DMSO-D6(50 g )质量规格：D,99.8%+TMS 0.03%Dimethyl Sulfoxide-D6

ARPE-19(人视网膜上皮细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R083大鼠滑膜细胞*培养基100mL EB病毒转化的人B细胞(傣族);KM9405氘代DMSO-D6(50 g )质量规格：D,99.9%Dimethyl Sulfoxide-D6

C3H/An小鼠结缔组织细胞(L929-TK-);LTK-异鼠李素-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷（标准品）质量规格：HPLC≥98%,标准品Isorhamnetin 3-sophoroside-7-rhamnoside

Chang liver细胞，CCL13张氏肝细胞正常 人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293),APP-PS1细胞 豚鼠皮肤细胞;GP-S3(-)-Holostyligone质量规格：HPLC≥98%,标准品(-)-Holostyligone

Lncap clone FGC(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×25-羧基-X-罗丹明质量规格：>97%5-Carboxy-X- rhodamine; 5-ROX

Promocell C-20111 Keratinocyte GrowthMedium 2 KIT, 角质细胞生长培养基2型套装 500ml,丙硫氧嘧啶（标准品）质量规格：含量测定Propylthiouracil

人主动脉内皮细胞HAECD-果糖(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品D-Fructose

人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293);APP-PS1AMVREVERSETRANSCRIPTASE反转录酶生物技术级FROZENsigma

RKO细胞，结肠腺癌细胞 人鼻咽癌细胞系,SUME-a细胞 CL-0371K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨细胞)5×106cells/瓶×2;1,4-二羌基丁烷 1,4-Butcnqdiol;1,4-Dixy7noxybutcnq;TqtrcMqthylqnq glycol

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNA2-糠醋酯 Mqthyl 2-furoctq 611-13-

IL34 Others Mouse 小鼠 IL-34 人细胞裂解液 (阳性对照) 高分子量标准蛋白，英文名或英文缩写：High range protein MW marker，级别：BR，10u/mg，规格：1公斤

U-2 OS, 人骨肉瘤细胞9000-70-8明胶;白明胶;动物胶;筋胶;银明胶Gelatin;Puragel

H9c2(2-1) (大鼠心肌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0344HAN(人羊膜细胞)5×106cells/瓶×2 牛肾细胞;MDBK双（标准品）Dicoumarol质量规格：HPLC≥98%，标准品

小鼠成纤维细胞;φ2水晶兰苷（标准品）Monotropein质量规格：HPLC≥98%，标准品

转基因品系马铃薯ATBT04-27 PCR试剂盒17. 脂肪细胞系统水仙苷(标准品）Narcissoside质量规格：HPLC≥98%，标准品

CM-R096大鼠表皮角质形成细胞*培养基100mLOSU03012OSU-03012(AR-12)质量规格：>98%,有效的重组PDK-1抑制剂

小鼠细胞白血病;L1210 小鼠食管上皮细胞*培养基 100mL斯皮诺素(标准品)Spinosin质量规格：HPLC≥98%，标准品