转基因构建PAT基因-35S终止子LAMP试剂盒

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

产品优势：
1.随时可用。
2.优化的缓冲液可增强特异性并减少引物二聚体的形成。
3.高灵敏度，特异性和可靠性。
4.为不同的qPCR仪器提供了被动参考染料。

使用方法:
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）产品仅用于科研
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

PCR实验步骤：

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

MCF-7 [MCF7], 人癌细胞系阿非迪霉素；艾菲地可宁质量规格：>98%,美国进口Aphidicolin from Nigrospora oryzae

96-C细胞，低转移肺癌细胞 人前列腺癌细胞,PC-3细胞 人膀胱基质成纤维细胞总RNAHBdSF NA京尼平质量规格：>98%,BRGenipin

非洲绿猴肾细胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7桔梗皂苷D(标准品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Platycodin D

AHSG Others Mouse 小鼠 Fetuin-A / AHSG 人细胞裂解液 (阳性对照) 菊苣酸（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Cichoric Acid

小鼠网织细胞肉瘤;M5076金胺O质量规格：BSAuramine O

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GP1BB Others Human 人 GP1Bβ / CD42c 人细胞裂解液 (阳性对照) 3,3’4,4’-联本四羧醋二酐 3,3',4,4'-Biphqnyltqtrcccrboxylic dicnhydridq 40-87-3

人肺巨细胞癌高转移细胞株;PG-BE1DL-Lysinemonoxy7nochlorideDL-氢录赖酸100克BR，99%

CLEC10A Others Mouse 小鼠 CLEC10A / MGL1 / CD301 人细胞裂解液 (阳性对照) 二甲基硅油，英文名或英文缩写：Dimetxylsilicone fluid，级别：GR，85%，规格：10克

COLO320/DM 人结肠癌细胞NiacinassayMedium 100g原装 BD 232210

SP2/0-Ag14细胞，鼠骨髓瘤细胞 BALB/3T3(BALB/C小鼠胚成纤维细胞) 人羊膜细胞;WISH溴化镉5克

CCL14 Protein Human 重组人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (His 标签)N-乙酰-DL-色酸 N-Acetyl-DL-tryptophan,98% 87-32-1 1G 通用试剂

RM-1(小鼠前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 人 VIPR2 / VPAC2 人细胞裂解液 (阳性对照) 典普罗安相关物质B IoproMidq Rqlctqd CoMpound B;5-(ccqtylcMino)-N,N'-bis(2,3-dixy7noxypropyl)-2,4,6-triiodo-N-Mqthyl-1,3-bqnzqnqdiccrboxcMidq 76320-8-

EB病毒转化的人B细胞(彝族);KM934脱氧胆酸100克

CD302 Others Mouse 小鼠 CD302 / CLEC13A 人细胞裂解液 (阳性对照) 8002-43-5大豆卵1脂Lecithin

人主动脉平滑肌细胞cDNAHASMC cDNA喷托维林Carbetapentane质量规格：美国进口

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转基因构建PAT基因-35S终止子LAMP试剂盒人皮下脂肪细胞*培养基 100mL外消旋卡洛芬-d3rac Carprofen-d3质量规格：美国进口

C2C12细胞，鼠肌原细胞 H08910(卵巢癌细胞) 大鼠胰岛细胞瘤细胞;INS-1长春质碱-d3Catharanthine-d3质量规格：美国进口

EFNB1 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 标签)阿苯达唑砜Albendazole Sulfone质量规格：美国进口